本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對PAT基因的核酸序列設計特異性引物和探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光PCR 反應對轉基因成分進(jìn)行定性檢測。本試劑盒適用于大豆、玉米、番茄、馬鈴薯、水稻、小麥等農產(chǎn)品及其加工產(chǎn)品中轉基因成分的定性PCR檢測，加工產(chǎn)品不包含食用油脂和調味品。

參考標準

行業(yè)標準SNT 1202-2010

產(chǎn)品規格

 40次/盒

主要成分 

儲存條件

本試劑盒保存于-20℃，有效期12 個(gè)月

檢測步驟

1.樣本處理采用均質(zhì)器、攪拌機、研缽等實(shí)驗器皿對樣本進(jìn)行均質(zhì)處理。

2.樣本DNA提取采用商品化的植物基因組DNA提取試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明提取樣本 DNA。對提取的 DNA 進(jìn)行濃度測定， DNA 溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 為最佳。

3.試劑準備冰上解凍反應試劑，反應液保持避光，解凍后將反應液混勻并簡(jiǎn)短離心，按每管22ul的量分裝至 PCR 管中。

4.PCR加樣每管中加入DNA樣本 3ul （ DNA 濃度為50ng/ul 左右），蓋好管蓋，簡(jiǎn)短離心，同時(shí)做陽(yáng)性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本 DNA ）。

5.PCR擴增將加好的樣品放置在PCR儀中， 熒光通道選擇FAM， PCR 反應參數見(jiàn)表，使用不同的 PCR儀，反應參數可適當調整。

 6.結果分析

基線(xiàn)和閾值的設置：基線(xiàn)范圍設置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設置在基線(xiàn)剛好超過(guò)陰性對照擴增曲線(xiàn)的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽(yáng)性對照CT≤30，有S 型擴增曲線(xiàn)；陰性對照無(wú)CT值，擴增曲線(xiàn)為直線(xiàn)；空白對照無(wú)CT值，擴增曲線(xiàn)為直線(xiàn)。若出現任一結果不正常，需重做實(shí)驗。

結果判定

1.檢測樣品無(wú)CT值，曲線(xiàn)為直線(xiàn)或無(wú) S 型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陰性。

2.檢測樣品CT≤36，出現S型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陽(yáng)性。

3.檢測樣品36﹤CT ﹤40并有S型擴增曲線(xiàn)，需適當增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測，再次檢測結果CT值仍處于36和40之間，并且有S 型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陽(yáng)性，否則判定為陰性。 

最低檢測限   

 0.1%

注意事項

1.初次使用前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，并嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗操作要嚴格分區，防止污染。

3.建議先用實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測內源基因來(lái)判定樣本提取的 DNA 是否滿(mǎn)足 PCR檢測要求。

4.反應液反復凍融會(huì )降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。