阪崎腸桿菌（Enterobactersakazaii）是奶粉（乳）制品中新發(fā)現的一種致病菌。由其引發(fā)的嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥及壞死性結腸炎散發(fā)和暴發(fā)的病例已在全球相繼出現。本公司自主研發(fā)的阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對阪崎腸桿菌基因的核酸序列設計特異性引物和探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光 PCR反應對奶粉（乳）制品中的阪崎腸桿菌進(jìn)行定性檢測，靈敏度高，特異性強，能快速檢測出奶粉（乳）制品中的阪崎腸桿菌。

試劑盒組成

檢測步驟

1.樣本處理取100g(ml)樣品，加入900ml 的無(wú)菌蒸餾水，震蕩溶解，與 37度培養15h 左右。移取 1ml轉入 10ml 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯中， 37度震蕩培養約5h 。

2.樣本DNA提取取1.5ml增菌液，采用商品化的細菌DNA 提取試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明提取樣本 DNA。對提取的DNA 進(jìn)行濃度測定， DNA溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 為最佳。

3.試劑準備冰上解凍反應試劑，反應液保持避光，解凍后將反應液混勻并簡(jiǎn)短離心，按每管20ul的量分裝至PCR 管中。

4.PCR加樣每管中加入DNA樣本5ul ，蓋好管蓋，簡(jiǎn)短離心，同時(shí)做陽(yáng)性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本 DNA）。

5.PCR擴增將加好的樣品放置在PCR 儀中，熒光通道選擇FAM ， PCR 反應參數見(jiàn)表，使用不同的PCR 儀，反應參數可適當調整。

6.結果分析

基線(xiàn)和閾值的設置：基線(xiàn)范圍設置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設置在基線(xiàn)剛好超過(guò)陰性對照擴增曲線(xiàn)的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽(yáng)性對照CT≤30，有S 型擴增曲線(xiàn)；陰性對照無(wú)CT值，擴增曲線(xiàn)為直線(xiàn)；空白對照無(wú)CT值，擴增曲線(xiàn)為直線(xiàn)。若出現任一結果不正常，需重做實(shí)驗。

結果判定

1.檢測樣品無(wú)CT值，曲線(xiàn)為直線(xiàn)或無(wú)S 型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陰性。

2.檢測樣品CT≤35，出現S型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陽(yáng)性。

3.檢測樣品35﹤CT ﹤40并有S型擴增曲線(xiàn)，需適當增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測，再次檢測結果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陽(yáng)性，否則判定為陰性。檢出限

4cfu/ml(g)

包裝規格

 40次/盒

注意事項

1.初次使用前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，并嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗操作要嚴格分區，防止污染。

3.反應液反復凍融會(huì )降低靈敏度，建議分管保存。

4.本試劑盒僅供定性篩查用。

5.篩選陽(yáng)性的樣本需按國標法進(jìn)行確證。

儲藏條件與有效期

本試劑盒保存于-20℃，有效期 12個(gè)月。