志賀氏菌（Shigelia）引起的細菌性痢疾常發(fā)現于人員大量集中的地方，如餐廳和食堂。與其相關(guān)的食品包括色拉、生蔬菜、奶和奶制品、肉禽、水果和面包制品等。本公司自主研發(fā)的志賀氏菌活菌檢測試劑盒能快速特異地檢測出此類(lèi)食品中含有的志賀氏菌，且相比DNA-PCR的檢測方法，本檢測方法可以區分死菌和活菌，因此不需要進(jìn)行再次驗證。本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應對食品中的志賀氏菌進(jìn)行檢測，靈敏度高，特異性強，適用于乳制品、肉制品中志賀氏菌的定性檢測。

產(chǎn)品規格

40次/盒

主要成分

儲存條件

本試劑盒保存于-20℃，有效期12個(gè)月。

檢測步驟

1.樣本處理取25ml(g)樣品，加入 225ml的培養基，均質(zhì)后于 37 度增菌培養約 6h。

2.樣本RNA 提取取1ml增菌液，采用商品化的細菌 RNA提取試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明提取樣本 RNA 。采用反轉錄試劑盒將 RNA反轉錄成cDNA 待用。

3.試劑準備冰上解凍反應試劑，反應液保持避光，解凍后將反應液混勻并簡(jiǎn)短離心，按每管15ul的量分裝至 PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入cDNA樣本 10ul，蓋好管蓋，簡(jiǎn)短離心，同時(shí)做陽(yáng)性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本 cDNA ）。

5.PCR擴增將加好的樣品放置在PCR儀中， 熒光通道選擇FAM， PCR 反應參數見(jiàn)表，使用不同的PCR儀，反應參數可適當調整。

6.結果分析

基線(xiàn)和閾值的設置：基線(xiàn)范圍設置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設置在基線(xiàn)剛好超過(guò)陰性對照擴增曲線(xiàn)的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽(yáng)性對照CT≤30，有S 型擴增曲線(xiàn)；陰性對照無(wú)CT值，擴增曲線(xiàn)為直線(xiàn)；空白對照無(wú)CT值，擴增曲線(xiàn)為直線(xiàn)。若出現任一結果不正常，需重做實(shí)驗。

結果判定

1.檢測樣品無(wú)CT值，曲線(xiàn)為直線(xiàn)或無(wú)S 型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陰性。

2.檢測樣品CT≤35，出現S型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陽(yáng)性。

3.檢測樣品35﹤CT﹤40并有S型擴增曲線(xiàn)，需適當增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測，再次檢測結果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴增曲線(xiàn)，判定結果為陽(yáng)性，否則判定為陰性。

最低檢測限

5cfu/25g(ml)

注意事項

1.初次使用前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，并嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗操作要嚴格分區，防止污染。

3.RNA提取時(shí)要使用無(wú)RNA酶的槍頭和管子，防止RNA降解。

4.反應液反復凍融會(huì )降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。